一、劃不出單個(gè)菌落怎么辦?
(1)平板上有過多的水分;
(2)劃線時(shí)接種環(huán)未經(jīng)反復(fù)灼燒。
(3)多區(qū)劃線,三區(qū)或四區(qū)劃線。
二、培養(yǎng)基配制時(shí)應(yīng)注意的問題:
(1)滅菌溫度要嚴(yán)格控制,按照要求滅菌,尤其含糖量較高的培養(yǎng)基溫度不應(yīng)太高,過高會(huì)導(dǎo)致糖分焦化,影響質(zhì)量。
(2)瓊脂培養(yǎng)基不能反復(fù)溶化。反復(fù)溶化會(huì)破壞培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分。
(3)培養(yǎng)基不能反復(fù)滅菌,反復(fù)滅菌也會(huì)導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)成分的破壞。
(4)含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌后,要搖勻。
三、平板的保存:大多數(shù)平板如VRBA、DC、、尿素酶生化管、顯色系列等要避光低溫保存。
四、產(chǎn)品的保存:
(1)干粉培養(yǎng)基:避光干燥,結(jié)塊后不能使用。
(2)亞碲酸鉀卵黃增菌液、50%卵黃乳液等:冷凍保存,使用時(shí),要常溫解凍,避免水浴加熱。
(3)抗生素類:冷藏保存,溫度過高會(huì)導(dǎo)致靈敏度的下降。
(4)兔血漿:冷藏保存少量的紅色不會(huì)影響結(jié)果。
五、觀察時(shí)間的掌握:按SN、GB等標(biāo)準(zhǔn)或培養(yǎng)基的使用說明所述時(shí)間進(jìn)行觀察,時(shí)間過短或時(shí)間過長(zhǎng),單菌落的特征都不會(huì)很明顯。如單增李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基,時(shí)間短單菌落看不到卵磷脂環(huán),時(shí)間長(zhǎng)綿羊李氏菌也會(huì)產(chǎn)生沉淀環(huán)。OXA、PALCAM的觀察也如此,時(shí)間過長(zhǎng),李氏菌使整個(gè)平板成黑色,不利于觀察單個(gè)菌落。
六、添加劑的添加:
(1)溫度的掌握。卵黃和抗生素類添加的溫度都不應(yīng)太高。
(2)定量。過多會(huì)抑制一些目標(biāo)菌,太少又導(dǎo)致雜菌的過度生長(zhǎng)。
七、培養(yǎng)溫度的掌握:
(1)真菌類。25-28℃培養(yǎng)
(2)細(xì)菌類。李氏菌在增菌和生化中要求培養(yǎng)溫度在30℃左右。
(3)其他一般在36℃左右
八、接種方法:常用的方法主要有劃線、三點(diǎn)接種、穿刺接種、傾注接種、涂布接種、液體接種。
九、革蘭氏染色方法:染色時(shí)間的掌握、沖洗的方法。
十、生化實(shí)驗(yàn):
(1)接種的方法
(2)氧化型和發(fā)酵型實(shí)驗(yàn)操作
(3)陽(yáng)性菌種的對(duì)照
(4)接種前的純化。挑取單個(gè)菌落進(jìn)行一系列的生化。
十一、關(guān)于殺菌的幾個(gè)概念:
(1)抑制:是在亞抑制劑量因子作用下導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)停止,但在移去這些因子后生長(zhǎng)仍可以恢復(fù)的生物學(xué)現(xiàn)象。
(2)死亡:在致死劑量因子的作用下或在亞致死劑量因子長(zhǎng)時(shí)間的作用下,導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)能力不可逆喪失,即使移去這種因子后生長(zhǎng)仍不能恢復(fù)的生物學(xué)現(xiàn)象。
(3)防腐:在某些化學(xué)物質(zhì)或物理因子作用下,能防止或抑制微生物生長(zhǎng)的一種措施,它能防止食物腐敗或防止食物霉變。
(4)消毒:利用某種方法殺死或滅活物質(zhì)或物體中所有病原微生物的一種措施,它可以起到防止感染和傳播的作用。
(5)滅菌:利用某種方法殺死物體中包括芽孢在內(nèi)的所有病原微生物的一種措施。
(6)化療:利用具有選擇毒性的化學(xué)物質(zhì),例磺胺、抗生素等對(duì)生物體內(nèi)部被微生物感染的組織或病變細(xì)胞進(jìn)行治療,以殺死組織內(nèi)的病原微生物或病變細(xì)胞,但對(duì)有機(jī)體無毒害作用的治療措施。