應(yīng)廣大粉絲的需求,小編將陸續(xù)推出《微生物檢驗(yàn)問答集錦》系列。本系列所列出的問題均是微生物檢驗(yàn)過程中提問頻次較高的問題,我們咨詢專家老師后匯編,希望可以幫助微生物檢驗(yàn)從業(yè)人員對(duì)檢驗(yàn)過程中遇到的問題有新的理解。大家對(duì)感興趣的、比較關(guān)注的問題,也可以后臺(tái)留言,我們一起交流探討!
問、滅菌鍋化學(xué)檢驗(yàn)和生物檢驗(yàn)是每次實(shí)驗(yàn)都需要做嗎?還是定期檢驗(yàn)一下滅菌鍋的性能呢?
答:化學(xué)法是每次都要做的,生物法可以定期做,根據(jù)滅菌鍋的使用頻率,每周、每半月或每月做一次即可。
問:沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)上會(huì)不會(huì)生長(zhǎng)細(xì)菌?
答:SDA不是選擇性培養(yǎng)基,而是一種廣譜的增菌培養(yǎng)基,pH范圍5.4-5.8,某些細(xì)菌是可以在SDA上生長(zhǎng)的,霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)時(shí)SDA上生長(zhǎng)的菌均應(yīng)計(jì)入霉菌和酵母菌總數(shù);或者可以經(jīng)過評(píng)估選擇含有抗生素(如氯霉素)的SDA或者玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)。
問:瓊脂培養(yǎng)基為什么需要倒置培養(yǎng)?
答:在進(jìn)行微生物培養(yǎng)時(shí),若正置培養(yǎng),瓊脂培養(yǎng)基中的水分易蒸發(fā)使平板干裂,不利于微生物的生長(zhǎng);同時(shí)水蒸汽會(huì)在平皿蓋上形成冷凝水,若回落在培養(yǎng)基表面,會(huì)使菌落蔓延生長(zhǎng),無法計(jì)數(shù),若冷凝水太多會(huì)使培養(yǎng)基與平皿分離,容易滑動(dòng)倒置培養(yǎng)可減少培養(yǎng)基表面的空氣流動(dòng),減慢培養(yǎng)基中水分蒸發(fā)的速度,充分維持彈性,有利于菌株的生長(zhǎng)和繁殖,防止空氣中雜菌對(duì)培養(yǎng)基及培養(yǎng)物造成污染;也會(huì)由于重力作用在一定程度上使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)沉積到培養(yǎng)基表面,有利于微生物利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì);倒置的平板方便拿取,避免環(huán)境中雜菌的污染。
需要注意的是,《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)》(GB4789.15-2016)是要求正置培養(yǎng),而非倒置,以防霉菌孢子形成次生菌落,影響計(jì)數(shù)結(jié)果。
問:食品企業(yè)的環(huán)境檢測(cè)應(yīng)該依據(jù)那個(gè)標(biāo)準(zhǔn)?
答:GB/T16294-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》都有規(guī)定,可以做為參考。
問:請(qǐng)問高壓滅菌鍋需要操作人員有壓力容器操作證嗎?有些人說屬于《特種設(shè)備安全監(jiān)察條例》需要操作證?
答:CNAS-CL 01-A001: 2018的 6.2.2.2條款里有說講到,如實(shí)驗(yàn)室使用的高壓蒸汽滅菌器不屬于簡(jiǎn)單壓力容器(定義參見TSG R0003 -2007《簡(jiǎn)單壓力容器安全技術(shù)監(jiān)察規(guī)程》)時(shí),操作人員需持有特種作業(yè)人員證。
問:
答:開瓶后的培養(yǎng)基,如果長(zhǎng)時(shí)間不使用,還在效期內(nèi),建議開瓶后間隔1年進(jìn)行復(fù)驗(yàn)。如果出現(xiàn)結(jié)塊,則不能使用。同理,如果同一批次一次購(gòu)買量較多,一年內(nèi)未使用完,也建議進(jìn)行復(fù)檢。
問:控制菌檢查法中用到的培養(yǎng)基,在做培養(yǎng)基適用性的時(shí)候,其中有“指示特性”的表述,那么“指示特性”是指的什么意思?
答:培養(yǎng)基指示特性包括菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況(菌落顏色變化)等。例如大腸埃希氏菌在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上桃紅色菌落有沉淀環(huán)、乙型副傷寒沙門菌在XLD有黑心等。
問:什么是不可接受微生物?
答:不可接受微生物通常是指那些已知有明顯致病性的,存在足夠的數(shù)量,通過產(chǎn)品的給藥途徑可能導(dǎo)致患者不可接受風(fēng)險(xiǎn)的微生物。如何確定一種微生物是不可接受的,需要進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析,包括微生物負(fù)載量、微生物特性、產(chǎn)品特性、給藥途徑、對(duì)患者潛在影響等。
問: 培養(yǎng)基滅菌沒有按照廠家提供的滅菌參數(shù)進(jìn)行,是否可行?
答:可以。廠家產(chǎn)品說明書提供的滅菌參數(shù)可作為參考使用,使用單位也可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況,在相關(guān)法規(guī)要求內(nèi),使用自己驗(yàn)證過的滅菌參數(shù)來執(zhí)行。
【法規(guī)來源:中國(guó)藥典2020版9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則 ……培養(yǎng)基滅菌應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗(yàn)證的參數(shù)進(jìn)行……】
問:革蘭氏染色有哪些注意事項(xiàng)?
答:(1)最好挑選18-24h的菌落進(jìn)行革蘭氏染色,培養(yǎng)時(shí)間過久的的革蘭氏陽性細(xì)菌可能會(huì)被染成紅色而造成假陰性。
(2)挑取適量的菌,不宜過多,均勻涂開。
(3乙醇脫色是革蘭氏染色是否成功的關(guān)鍵,15-30s為宜,脫色不夠可能會(huì)造成假陽性,脫色過度可能會(huì)造成假陰性。
問:如何根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要制備斜面?
答:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,擺放斜面一般有三種形式:
(1)長(zhǎng)斜面:斜面底部剛覆蓋試管底部,上部距管口2.5-3cm左右;例如TSA傳代斜面。
(2)高層斜面:斜面與底層高度約為2:3,即底部高約3cm,斜面長(zhǎng)度約2cm;如三糖鐵高層斜面。
(3)普通斜面:斜面底部距試管底部約1cm,上部距管口約2.5-3cm。
問:三糖鐵培養(yǎng)基顏色變化原理是什么?
答:該培養(yǎng)基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1,只能利用葡萄糖的細(xì)菌,分解葡萄糖產(chǎn)酸可使斜面先變黃,但因量少,生成的少量酸接觸空氣而氧化,加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì),生成堿性產(chǎn)物,故使斜面后來又變紅,底部由于是在厭氧狀態(tài)下,酸類不被氧化,所以仍保持黃色。而發(fā)酵乳糖的細(xì)菌則產(chǎn)生大量的酸,使整個(gè)培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。如菌種接至培養(yǎng)基培養(yǎng)后產(chǎn)生黑色沉淀,是因?yàn)槟承┘?xì)菌能分解含硫氨基酸,生成硫化氫,硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反應(yīng),生成黑色的硫化亞鐵沉淀。
問:如果三糖鐵上斜面紅色、底層黃色,中間有黑色且產(chǎn)氣,能否判定為沙門菌?
答:不能。某些非沙門菌也能在三糖鐵上呈現(xiàn)和沙門菌一樣的顏色變化,例如奇異變形桿菌。如三糖鐵上有上述顏色變化,需要進(jìn)一步的進(jìn)行適宜的鑒定試驗(yàn),確證是否為沙門菌。
如果采用傳統(tǒng)的生化鑒定,可參考GB 4789.4-2016中沙門氏菌檢驗(yàn)的方法。
來源:網(wǎng)友提問,小編搜集整理