一、基本條件
(一)檢驗人員具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)職務(wù)任職資格,經(jīng)培訓(xùn)能夠熟練掌握血鉛分析技術(shù),通過盲樣考核,嚴(yán)格遵守質(zhì)量保證規(guī)程。
(二)實驗室干凈、整潔,無鉛污染源。
(三)具備凈化實驗室條件或配備超凈柜(臺),或者具有已采取其他局部防塵措施的實驗臺。
(四)檢測所用儀器、耗材、試劑符合國家有關(guān)規(guī)定,并有措施保證檢測系統(tǒng)的完整性和有效性。
二、基本檢測方法
(一)降低分析空白的控制措施
血鉛測定屬微量或痕量分析,必須盡可能避免各個環(huán)節(jié)的鉛污染,所有進(jìn)樣前的操作必須在符合基本條件要求的情況下進(jìn)行,必須把分析空白降至方法的檢測限以下。為了降低空白值,必須做到:
1、使用的所有試劑均應(yīng)采用最高的純度級別,并對其進(jìn)行空白檢驗,包括抗凝劑、清潔和消毒采血部位的藥劑等。
2、所有器皿、用品(注射器、真空采血管或聚乙烯管、消毒棉簽等)必須是一次性使用,并需抽樣進(jìn)行空白檢驗,每個批號抽樣量不得小于10支。必要時對所有器皿、用品應(yīng)先行無鉛化處理。
3、分析者必須避免自身因素(化妝品、外敷藥物、乳膠手套等)對樣品的污染。
(二)基本檢測方法
目前的基本檢測方法包括以下3種:
WS/T 20—1996 血中鉛的石墨爐原子吸收光譜測定方法
WS/T 21—1996 血中鉛的微分電位溶出測定方法
WS/T 174—1999 血中鉛、鎘的石墨爐原子吸收光譜測定方法
方法確定后,應(yīng)當(dāng)對其準(zhǔn)確度、精密度、檢測限和定量檢測限進(jìn)行驗證,并制定本實驗室具體操作規(guī)程。
(三)準(zhǔn)確度表達(dá)
測定基體和濃度相同或相近的國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(如GBW09131~09133,GBW09139~09140等),測定結(jié)果應(yīng)落入給定的標(biāo)準(zhǔn)值±不確定度的范圍內(nèi)。
(四)精密度表達(dá)
血鉛檢測方法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)〔(多次測定的標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值)×100〕應(yīng)根據(jù)測定濃度范圍的不同而分別為:濃度在20~100μg/L時,RSD≤15%;濃度
> 100μg/L時,RSD≤10%。
(五)方法檢測限
檢測限是可以確知被檢出的最低濃度。血鉛測定方法的檢測限(空白測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差的3倍)不得大于6μg/L。
(六)方法定量檢測限
定量檢測限是在給定的置信水平區(qū)間內(nèi)可報告的樣品準(zhǔn)確定量的最低濃度。血鉛檢測定量下限(空白測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍)不得大于20μg/L。
三、質(zhì)量保證
血鉛檢測的質(zhì)量保證措施包括分析前質(zhì)量保證、分析中質(zhì)量保證和分析后的質(zhì)量保證。
(一)分析前的質(zhì)量保證
1、采血前的準(zhǔn)備
(1)采血場所必須遠(yuǎn)離鉛污染源,分別設(shè)置采血間和等候間,兩間相鄰,均有流動溫水洗手設(shè)備。室內(nèi)地面和墻壁應(yīng)易于濕式清洗。采血間四壁無懸掛物,除必要的桌椅外無雜物。采血前清潔采血場所。采血室不得使用風(fēng)扇降溫。
(2)儲血容器采用經(jīng)抽樣空白檢測合格的真空采血管(預(yù)置抗凝劑)或?qū)?o:p>
驗室用的優(yōu)質(zhì)聚乙烯離心管(1.5ml)。使用后者,應(yīng)預(yù)先加入已經(jīng)過空白檢測的抗凝劑,如7%的依地酸鈉或0.2%肝素鈉溶液5—10μl,陰干(并經(jīng)抽樣空白檢驗合格)。
(3)所有采血人員要經(jīng)過嚴(yán)格培訓(xùn)并熟悉采血過程,知曉操作技術(shù)對血鉛檢測質(zhì)量的影響。采血前應(yīng)征得被采血者的同意;若屬兒童,應(yīng)向其父母或監(jiān)護人解釋采血的過程。
2、兒童血樣采集要求
(1)用于兒童鉛中毒診斷的血樣必需采集靜脈血。
(2)群體篩查可采用末梢血,但必須采取嚴(yán)格的防范措施防止污染。血鉛水平≥200μg/L時,應(yīng)復(fù)查靜脈血。
3、血樣采集
血樣采集在采血間進(jìn)行。采血人員應(yīng)戴乳膠或聚乙烯手套。若手套涂粉,接觸受檢者或血樣前應(yīng)先用靜脈采血皮膚清潔法處理手套后再進(jìn)行操作。
(1)采集靜脈血
①按順序用0.2%硝酸、純水、碘酒、酒精(或用約5%“洗潔凈”棉球、2%依地酸鈉棉球、酒精棉球)清潔取血區(qū)皮膚。
②使用經(jīng)過檢驗的同一批號的一次性注射器抽取靜脈血,穿刺成功后立即松開止血帶。如使用真空采血管可直接注入,并立即搖晃均勻。如使用聚乙烯管留置樣本,應(yīng)當(dāng)留存雙份樣本,每管血樣為0.5~1ml,注入后立即搖晃均勻,與抗凝劑充分混合。
(2)采集末梢血
①在等候間:用肥皂仔細(xì)的搓洗被采血者的雙手,特別是擬采血的手指,用溫水沖洗后,再用經(jīng)空白檢驗的紙巾將手檫干,并用紙巾將擬采血的手指包住,等待進(jìn)入采血間。如果是嬰幼兒,護理嬰幼兒的成人也應(yīng)同時洗手。1歲以下嬰幼兒可以采集拇趾或足跟部血。
②在采血間:用0.2%硝酸、純水、碘酒、酒精(或用約5%“洗潔凈”棉球、2%依地酸鈉棉球、酒精棉球)先后清潔擬采血的中指或無名指,自然晾干,用一次性刺血針(有條件時可以使用可回縮的采血器)刺破中指或無名指指腹的側(cè)面指甲邊沿至指肚中線的1/2處,立即轉(zhuǎn)動手指,使刺破口向下,讓血液形成自然血滴流出,放棄第一滴血液,用經(jīng)過上述方法處理過的聚乙烯小管收集血滴。必要時可輕輕地從指根向指端推動,以助血液流出。采集足夠平行雙樣的血樣量后,立即蓋好蓋子,直立渦旋混勻以使與抗凝劑充分混合。
4、留置采血空白樣
在每次采血開始前、采血中和采血結(jié)束時,分別用經(jīng)過鉛空白檢驗的0.5%硝酸替代血液,各做兩個采樣空白(包括真空采血管和聚乙烯管),以了解采樣過程中可能的污染情況。
5、血樣的保存
采集血液標(biāo)本的試管口朝上放置于試管架中,置4度冰箱保存。保存實踐不得超過2周,門診樣品不得超過48小時。
(二)分析中的質(zhì)量保證
分析中的質(zhì)量保證包括實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制和實驗室室間質(zhì)量評價(或能力驗證)。
1、實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制
實驗室可繪制室內(nèi)質(zhì)控圖,以評價本實驗室的檢測質(zhì)量。以每工作日實際檢測分析中所測國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不同濃度檢測結(jié)果,分別標(biāo)點制圖。
2、實驗室室間質(zhì)量評價
實驗室應(yīng)當(dāng)按時參加衛(wèi)生部認(rèn)定的室間質(zhì)量評價機構(gòu)組織的室間質(zhì)量評價活動。對接受質(zhì)控樣的檢測應(yīng)隨機加入日常血鉛樣品檢測序列中進(jìn)行,不得另選檢測系統(tǒng)專門分析,以真正反映本實驗室的實際檢測水平。根據(jù)室間質(zhì)量評價結(jié)果,決定是否采取糾正措施。
4、校準(zhǔn)曲線
(1)每次分析樣品時必須制備校準(zhǔn)曲線。校準(zhǔn)曲線應(yīng)由空白及3~5個已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,按樣品的測定步驟制備。必要時,包括樣品的前處理操作。
(2)以測量信號值為縱坐標(biāo),以濃度(或量)為橫坐標(biāo)制作校準(zhǔn)曲線,所應(yīng)用的校準(zhǔn)曲線信號值與濃度(或量)相關(guān)系數(shù)應(yīng)≥0.995;校準(zhǔn)曲線必須以能準(zhǔn)確表達(dá)國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(如GBW09131~09133;GBW09139~09140等)為準(zhǔn)。
(3)利用校準(zhǔn)曲線推測樣品濃度時,樣品濃度必須在所作校準(zhǔn)曲線的濃度范圍以內(nèi),不得將校準(zhǔn)曲線任意外延。
(4)校準(zhǔn)曲線必須考慮基體效應(yīng)。
5、平行樣的分析
每樣品必須進(jìn)行平行雙樣分析,平行雙樣測定誤差不得大于分析方法規(guī)定的批內(nèi)精密度的兩倍;或不得大于表1所列的最大偏差。
表1 平行雙樣測定允許的最大偏差
分析結(jié)果所在濃度范圍(μg/L)
平行樣最大允許偏差(%)★≥100
10 20~~100 15
★ 平行樣的最大允許偏差(%)=(兩個平行結(jié)果之差/兩個平行結(jié)果之和)×100
6、血樣測定質(zhì)量控制
為使檢測結(jié)果具有溯源性,血樣檢測中必須同時測定國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(如GBW09131~~09133或GBW09139~~09140等),并按圖1程序進(jìn)行質(zhì)量控制。
(1)在測定標(biāo)準(zhǔn)溶液制作完成工作曲線后,應(yīng)先分析兩個標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)血樣。該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)血樣的樣品前處理必須與檢測樣品前處理同批進(jìn)行;如標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的分析結(jié)果落在給定范圍內(nèi),就可按圖1程序進(jìn)行樣品分析。
(2)按圖1所示,每測定10個樣品的前后應(yīng)測定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)高、低兩點濃度。如發(fā)現(xiàn)樣品位置后面測定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)結(jié)果值落在給定范圍以外,應(yīng)立即中斷實驗程序,將前10個樣品結(jié)果視為無效,必須重新測定;待重新10個樣品測定后,再測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)高、低兩點濃度,合格后方可繼續(xù)實驗程序,否則,應(yīng)從制備工作曲線開始重新建立圖1所示程序。
7、實驗記錄
要如實記錄原始數(shù)據(jù),登記過的數(shù)據(jù)不能涂改,若發(fā)生差錯,應(yīng)在原數(shù)字上劃一條橫線表示消除,要注明修改原因并簽字。
(三)分析后質(zhì)量保證
1、報告方式
血鉛檢測報告必須以中文書寫,單位應(yīng)為μmol/L(μg/L)。
2、數(shù)據(jù)處理
測試和計算的數(shù)據(jù)只保留一位不確定數(shù)字。測定結(jié)果小于檢測限的數(shù)據(jù),應(yīng)報告“未撿出”,并同時報告方法的檢測限。統(tǒng)計處理時,可以用1/2檢測限的數(shù)值替代。測定結(jié)果大于檢測限但小于定量下限的數(shù)據(jù),按小于方法定量檢測限報告(須注定量檢測限值)。在報告群體的檢測結(jié)果時,必須同時報告能描述此群體數(shù)據(jù)特性的參數(shù)。