1 材料和方法
1.1 供試材料
采用當(dāng)家品種下寨65和青薯168.
1.2 試驗(yàn)方法
1.2.1 催芽 于11月中旬左右,挑揀表皮光滑、正常薯形、大小均勻、無(wú)病害和無(wú)損傷薯塊,放置在有供暖的房間,室內(nèi)溫度24 ℃左右進(jìn)行催芽。在催芽前薯塊正處于休眠期,采用0.05~0.l0 mg/L的GA3來(lái)處理薯塊,浸沒(méi)于GA3溶液中10~20 min,以打破休眠[4].
1.2.2 種薯處理 采用MS培養(yǎng)基,加入不同配比的激素,準(zhǔn)備BA、NAA、GA3、IBA和IAA,由于激素在培養(yǎng)基中用量非常少,且不易溶于水,所以采用特殊的配置方法,配置成500 mg/L的溶液待用。當(dāng)兩個(gè)品種的種薯芽長(zhǎng)到2~3 cm時(shí),挑選生長(zhǎng)健壯的芽,用清水沖洗芽部表面污物,在無(wú)菌操作室采用12種不同的方法進(jìn)行表面消毒,用最近制作的蒸餾水沖洗四五次,將表面消毒劑徹底清除,不同表面消毒劑處理時(shí)間見表1.
1.2.3 莖尖組織培養(yǎng) 在解剖鏡下剝?nèi)〈笮?.30~
0.50 mm莖尖生長(zhǎng)點(diǎn),置于不同濃度生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)基編號(hào)為MS1~MS12,另設(shè)不加任何生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基作為對(duì)照(CK),植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比見表2.
1.2.4 馬鈴薯脫毒苗培養(yǎng) 在無(wú)菌條件下,將得到的無(wú)毒苗進(jìn)行切段,每段帶一葉,置于不同種類、濃度的1/2MS培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),中國(guó)農(nóng)業(yè)網(wǎng)以不加任何生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的1/2MS培養(yǎng)基作為對(duì)照,編號(hào)為M1~M9,快繁培養(yǎng)基配比見表3.
2 結(jié)果與分析
2.1 不同表面消毒方法對(duì)莖尖成活率和污染的影響
從表4可以看出,在莖尖組織培養(yǎng)過(guò)程中,外植體在清水沖洗后,直接采用0.1 %升汞或5 %次氯酸鈉消毒,都可以將污染控制在5 %以下,但需時(shí)稍長(zhǎng),不同程度地影響到成活率。另外由于升汞的滲透性強(qiáng),不宜徹底清洗,且對(duì)環(huán)境污染嚴(yán)重,建議盡量不要使用。
2.2 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑培養(yǎng)基配比對(duì)莖尖組織生長(zhǎng)的影響
從表5可以看出,不含生物調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基,馬鈴薯莖尖組織的生長(zhǎng)非常緩慢,導(dǎo)致成苗率低下。在同等條件下,KT和6-BA對(duì)馬鈴薯莖尖組織的生長(zhǎng)都具有促進(jìn)作用,且效果顯著,就這兩種物質(zhì)而言,含有KT的培養(yǎng)基中成苗率較低。在同等條件下加入GA3,可明顯促進(jìn)馬鈴薯莖尖組織分化,加快生長(zhǎng),提高成苗率。
2.3 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比對(duì)馬鈴薯脫毒苗快繁的影響
經(jīng)過(guò)觀測(cè)表明,與對(duì)照培養(yǎng)基相比較,培養(yǎng)基中加入生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑后,芽萌發(fā)推遲,有效促進(jìn)幼根生長(zhǎng)。生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度過(guò)大時(shí),愈傷組織發(fā)達(dá),生根受到抑制。在實(shí)驗(yàn)中觀察到下寨65對(duì)NAA較為敏感,濃度稍大就會(huì)產(chǎn)生較大愈傷組織,生根較為緩慢,而青薯168反應(yīng)較為遲鈍,結(jié)果見表6.
3 結(jié)論
通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在馬鈴薯脫毒技術(shù)實(shí)施過(guò)程中,采用酒精與其他兩種表面消毒劑配合使用效果最好,能有效控制污染,降低對(duì)莖尖組織的影響。剝離的莖尖組織誘導(dǎo)成苗是脫毒快繁的關(guān)鍵技術(shù),在實(shí)驗(yàn)中,KT和BA均有助于莖尖組織分化成苗。在快繁中,適當(dāng)濃度的生物調(diào)節(jié)劑對(duì)馬鈴薯莖段生根有促進(jìn)作用,但當(dāng)濃度過(guò)高時(shí)只產(chǎn)生分生組織,不利于小苗生根,而且各品種表現(xiàn)有所不同。