1．細胞以1.5×105/ml細胞數接種于直徑35ml培養(yǎng)皿中（內放置一蓋玻片），培養(yǎng)1天，用含0.4％ FCS培養(yǎng)液同步化3天，使絕大多數細胞處于G0期。

2．終止細胞培養(yǎng)前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。

3．棄培養(yǎng)液，玻片用PBS洗滌3次。

4．甲醇/醋酸固定10min。

5．經固定的玻片空氣干燥，0.3％H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。

6．5％正常兔血清封閉。

7．甲酰胺100℃，5min變性核酸。

8．冰浴冷卻后PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。

9．按ABC法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數，計算標記指數（LI）。