亚洲欧美日韩国产综合网_自拍视频精品一区二区三区_无码激情AV一区二区三区_二天天AV综合网

VIP標識 上網(wǎng)做生意,首選VIP會員| 設為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
食品伙伴網(wǎng)服務號
 

質(zhì)粒DNA的提取及鑒定

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-02

  1.收獲細菌

 。1)將2ml含相應抗生素的LB液體培養(yǎng)基加入到通氣良好的15ml的試管中,接入一單菌落,于37℃劇烈振蕩培養(yǎng)過夜。
  (2)將1.5ml培養(yǎng)物倒入1.5ml離心管中,用臺式離心機于4℃以12000g離心5min,將剩余的培養(yǎng)物貯存于4℃。
 。3)吸盡培養(yǎng)液,使細菌沉淀盡可能干燥。

  2.堿裂解法小量抽提質(zhì)粒

 。1)將細菌沉淀[上述步驟(3)所得]重懸于100μl預冷的溶液Ⅰ(50mmol/L葡萄糖,25mmol/l Tris –HCl pH8.0, 10mmol/L EDTA)中,劇烈振蕩。
 。2)加200μl新配制的溶液Ⅱ(0.2mol/l NaOH, 1%SDS),緩和振蕩,水浴5min。
  (3)加150μl預冷溶液Ⅲ(50mol/L KAC 60ml, 冰乙酸11.5ml,水28.5ml),緩和振蕩,冰浴5min。
 。4)4℃以12000g離心5min,將上清轉(zhuǎn)移到另一離心管中。
 。5)可作不可作:加等量飽和酚,氯仿,振蕩混勻,重復2,(4)。
 。6)用2倍體積無水乙醇室溫沉淀雙鏈DNA,振蕩混合,于室溫放置2min。
 。7)4℃以12000g離心5min。
 。8)小心吸盡上清液,將離心管倒置于一張紙巾上,再將附于管壁的液滴除盡。
 。9)用75%乙醇于4℃洗滌DNA,同上離心去上清真空抽干。
 。10)加50μl的1×TE(含20μg/ml無DNA酶的胰RNA酶),振蕩,貯存于-20℃。


 

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點擊排行
 
 
Processed in 0.836 second(s), 596 queries, Memory 2.25 M