(1)用合適的酶切割DNA并電泳。
(2)于紫外燈下從凝膠上切下所要的DNA帶,裝入含1×TBE緩沖液的透析代內(nèi),用夾子封好袋口,并檢查有無漏孔。
。3)將透析袋(縱長)與兩極間的邊線垂直放于電泳槽內(nèi)電泳,4~5V/cm電泳至DNA貼緊袋壁。
。4)取出透析袋,擠出凝膠塊,吸出袋內(nèi)液體放入1.5ml的離心管內(nèi),10000rpm離心5min。
(5)吸出上清放入離心管內(nèi),加入等體積的飽和酚和等體積的氯仿,振蕩混勻,10000rpm離心5min,吸出上清放入新的離心管內(nèi)。
。6)加入1/10體積的3mol/L AaAc,2倍體積預(yù)冷的無水乙醇,于-20℃放置4~5h。
(7)于4℃,10000rpm離心15min,棄上清。
。8)用75%的酒精洗滌2次,每次均于4℃,10000rpm離心5min,棄上清。
。9)真空抽干,并用適量1×TE溶解沉淀。如此即得所需DNA片段。
(2)于紫外燈下從凝膠上切下所要的DNA帶,裝入含1×TBE緩沖液的透析代內(nèi),用夾子封好袋口,并檢查有無漏孔。
。3)將透析袋(縱長)與兩極間的邊線垂直放于電泳槽內(nèi)電泳,4~5V/cm電泳至DNA貼緊袋壁。
。4)取出透析袋,擠出凝膠塊,吸出袋內(nèi)液體放入1.5ml的離心管內(nèi),10000rpm離心5min。
(5)吸出上清放入離心管內(nèi),加入等體積的飽和酚和等體積的氯仿,振蕩混勻,10000rpm離心5min,吸出上清放入新的離心管內(nèi)。
。6)加入1/10體積的3mol/L AaAc,2倍體積預(yù)冷的無水乙醇,于-20℃放置4~5h。
(7)于4℃,10000rpm離心15min,棄上清。
。8)用75%的酒精洗滌2次,每次均于4℃,10000rpm離心5min,棄上清。
。9)真空抽干,并用適量1×TE溶解沉淀。如此即得所需DNA片段。