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我們做微生物實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，常用平板接種菌落，經(jīng)常會(huì)遇到在給平板接種菌之后卻沒有菌落生長(zhǎng)的情況。今天，我們來分析一下出現(xiàn)這種情況的原因。本文將從菌種、人員操作、培養(yǎng)基和添加劑三個(gè)方面來分析。
一、菌種原因
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菌種老化菌種如果經(jīng)過連續(xù)頻繁的傳代達(dá)十幾次甚至幾十次，就會(huì)造成菌種老化，岀現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢甚至不生長(zhǎng)的情況。
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野生菌種相比于標(biāo)準(zhǔn)菌株，有一些野生分離的菌種本身比較脆弱，對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求比較高，對(duì)外界不良環(huán)境也比較敏感，難以在普通的平板上生長(zhǎng)，往往需要加入特殊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
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菌種沒有進(jìn)行充分活化當(dāng)我們拿到一株菌的時(shí)候，該菌種往往是處于—個(gè)保藏狀態(tài)的，這就需要我們通過合適的培養(yǎng)基來逐代擴(kuò)大培養(yǎng)，得到活力旺盛的菌株，所以充分活化的目的就是要讓菌種逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境，從而在平板上快速生長(zhǎng)。
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樣品中的菌有的樣品中本身含菌量就較少，如水樣、供試液等，接種量低造成平板上無菌生長(zhǎng)。還有的樣品中含有一些抑菌成分，會(huì)殺死樣品中的菌，導(dǎo)致無菌落生長(zhǎng)。
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購買的商品化菌株有一些商品化的菌株，如益生菌、菌肥、可食用真菌等，本身進(jìn)行過基因改造，不能進(jìn)行連續(xù)傳代擴(kuò)大培養(yǎng)，故在平板上難以生長(zhǎng)。
二、人員操作不當(dāng)
1、容器未洗刷干凈，殘留的抑菌成分導(dǎo)致菌不生長(zhǎng)。
2、培養(yǎng)基配置過程中稱量錯(cuò)誤，加入添加劑比例錯(cuò)誤等。
3、過度滅菌，有很多培養(yǎng)基成分不耐高溫，過度滅菌會(huì)導(dǎo)致成分失效。
4、調(diào)pH值錯(cuò)誤，不同溫度下培養(yǎng)基的pH值也會(huì)不一樣，未正確的調(diào)配pH值，也會(huì)導(dǎo)致菌不生長(zhǎng)。
5、在實(shí)驗(yàn)操作過程中失誤，特別是在稀釋菌液過程中少接或者錯(cuò)接菌。
6、未放置合適的培養(yǎng)條件，根據(jù)不同菌對(duì)氧氣的需求程度，可以分為需氧、厭氧、微需氧培養(yǎng)等。根據(jù)不同菌對(duì)溫度的需求，又可以在25°C、30°C、35°C、42°C、56°C等不同溫度下培養(yǎng)。
三、培養(yǎng)基及添加劑原因
1、成品培養(yǎng)基本身質(zhì)量不好，如原材料純度不高、含有抑菌成分、原材料之間配比錯(cuò)誤等都會(huì)導(dǎo)致成品培養(yǎng)基不合格。
2、特殊培養(yǎng)基及添加劑未正確存放，未遮光、冷藏、嚴(yán)格密封保存等導(dǎo)致失效。
3、培養(yǎng)基及添加劑超過有效期或者臨近有限期，營(yíng)養(yǎng)成分存在一定程度的失效導(dǎo)致菌不生長(zhǎng)。
4、培養(yǎng)基及添加劑營(yíng)養(yǎng)不夠或者不適合培養(yǎng)某類菌種。有一些菌種本身營(yíng)養(yǎng)要求比較特殊，需要添加某些特殊營(yíng)養(yǎng)后方能生長(zhǎng)。
