細(xì)胞氧化應(yīng)激的定量評價(jià)方法大致分做三類:
1)測定由活性氧修飾的化合物;
2)測定活性氧消除系統(tǒng)酶和抗氧化物質(zhì)的量;
3)測定含有轉(zhuǎn)錄因子的氧化應(yīng)激指示物。
進(jìn)一步尚有:
1)生物體內(nèi)氧化應(yīng)激的程度足以產(chǎn)生應(yīng)答;
2)活體內(nèi)難以蓄積;
3)在活體內(nèi)不是被代謝,而是穩(wěn)定存在,等等。理解這些要點(diǎn)對于臨床普及推廣都很有用。
細(xì)胞增殖-毒性檢測實(shí)驗(yàn)操作步驟
終止液是用于測定細(xì)胞增殖或毒性實(shí)驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度,無放射性的比色檢測法。CCK法應(yīng)用非常廣泛,如藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測等。下面以BUNSEN的CCK8試劑盒為例,簡要說明細(xì)胞增殖-毒性檢測的操作步驟
方法/步驟
1.在96孔板中配制100μl的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí) (在 37℃,5% CO2 的條件下)。
2.向培養(yǎng)板加入10μl不同濃度的待測物質(zhì)。
3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間 (例如: 6,12,24或48小時(shí))。
4.向每孔加入10μl CCK8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì)影響OD值的讀數(shù))。
5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。
用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。
如果暫時(shí)不測定OD值,打算以后測定的話,可以向每孔中加10μl 0.1M HCl溶液或者1%wSDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化 。