1.無(wú)標(biāo)記對(duì)照DNA1 此管內(nèi)有20μl pBR328 DNA100μg/ml,pBR328分別用BamHⅠ,BglⅠt HinfⅠ消化,它們的混合比例為2:3:3,共有16個(gè)Pbr328片段,這些片段的大小分別為:4907,2176,1766,1230,1033,653,517,453,298,234,234,220和154×2bp。
2.無(wú)標(biāo)記對(duì)照DNA2 此管內(nèi)有20μl pBR328 DNA200μg/ml,已用EcoRⅠ線性化。
3.DNA稀釋緩沖液 有兩管,每管1ml[成分為:Tris-HCl(10mmol/L),EDTA(1mmol/L),pH8.0(20℃)]內(nèi)含鮭魚精DNA(50μg/ml)。
4.標(biāo)記對(duì)照DNA 此管內(nèi)有50μl線性化pBR328DNA,按標(biāo)記方法已標(biāo)記有地高辛配基dUTP,含20μg模板DNA,每毫升含5μg合成的標(biāo)記DNA。
5.六聚核苷酸混合物
6.標(biāo)記用混合底物 此管內(nèi)有50μl 10倍濃度的dNTP標(biāo)記用混合底物,含dATP(1mmol/L)dCTP(1mmol/L),dGTP(1mmol/L),dTTP(0.65mmol/L)和Dig-dUTP(0.35mmol/L),pH6.5(20℃)。
7.DNA聚合酶Ⅰ大片段(標(biāo)記級(jí)) 此管內(nèi)有25μl DNA聚合酶Ⅰ大片段(Klenow),2U/μl。
8.(Dig)AP結(jié)合物 此管內(nèi)有200μl多克隆羊抗地高辛配基Fab-片段,結(jié)合有堿性磷酸酶750U/ml。
9.NBT 有兩管,每管1.25ml,是溶于70%(V/V)二甲基甲酰胺的硝基藍(lán)四唑鹽溶液(75mg/ml)。
10.X-磷酸鹽 有兩管,每管0.9ml,是溶于二甲基甲酰胺的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽的甲苯胺溶液(50mg/ml)。
11.封阻試劑 有兩瓶,每瓶有50g粉劑。
2.無(wú)標(biāo)記對(duì)照DNA2 此管內(nèi)有20μl pBR328 DNA200μg/ml,已用EcoRⅠ線性化。
3.DNA稀釋緩沖液 有兩管,每管1ml[成分為:Tris-HCl(10mmol/L),EDTA(1mmol/L),pH8.0(20℃)]內(nèi)含鮭魚精DNA(50μg/ml)。
4.標(biāo)記對(duì)照DNA 此管內(nèi)有50μl線性化pBR328DNA,按標(biāo)記方法已標(biāo)記有地高辛配基dUTP,含20μg模板DNA,每毫升含5μg合成的標(biāo)記DNA。
5.六聚核苷酸混合物
6.標(biāo)記用混合底物 此管內(nèi)有50μl 10倍濃度的dNTP標(biāo)記用混合底物,含dATP(1mmol/L)dCTP(1mmol/L),dGTP(1mmol/L),dTTP(0.65mmol/L)和Dig-dUTP(0.35mmol/L),pH6.5(20℃)。
7.DNA聚合酶Ⅰ大片段(標(biāo)記級(jí)) 此管內(nèi)有25μl DNA聚合酶Ⅰ大片段(Klenow),2U/μl。
8.(Dig)AP結(jié)合物 此管內(nèi)有200μl多克隆羊抗地高辛配基Fab-片段,結(jié)合有堿性磷酸酶750U/ml。
9.NBT 有兩管,每管1.25ml,是溶于70%(V/V)二甲基甲酰胺的硝基藍(lán)四唑鹽溶液(75mg/ml)。
10.X-磷酸鹽 有兩管,每管0.9ml,是溶于二甲基甲酰胺的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽的甲苯胺溶液(50mg/ml)。
11.封阻試劑 有兩瓶,每瓶有50g粉劑。