一、用途
沙門(mén)氏菌乳膠凝集檢測(cè)試劑用于確證鑒定選擇性平板上分離出的可疑菌落。該試劑盒僅供專業(yè)人員使用。
二、原理
乳膠顆粒表面包被與沙門(mén)氏菌特異性抗原具有特異性的多價(jià)抗血清。與沙門(mén)氏菌菌懸液混合后,乳膠顆粒可迅速凝集。HKM®沙門(mén)氏菌乳膠凝集試劑盒可檢測(cè)99%以上的有動(dòng)力的沙門(mén)氏菌和特定的無(wú)動(dòng)力沙門(mén)氏菌。
三、試劑盒組成成分
REAG TEST 測(cè)試試劑 HM
乳膠顆粒包被沙門(mén)氏菌抗原相應(yīng)的兔抗血清。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(藍(lán)色瓶蓋)
CONTROL + 陽(yáng)性對(duì)照試劑 HM42b 陽(yáng)性對(duì)照 0.5mL
無(wú)活性的沙門(mén)氏菌抗原,含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(黑色瓶蓋)
NaCl 0.85% 0.85%鹽水 HM40 0.85%生理鹽水 5.0mL
含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(白色瓶蓋)
使用說(shuō)明書(shū)
檢測(cè)板
攪拌棒
需要的其它材料
l 接種環(huán)
l 移液器
四、警告和注意事項(xiàng)
安全:
1、試劑僅供體外診斷使用。
2、試劑盒作防腐劑使用的疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應(yīng)形成易爆的金屬疊氮化物?捎么罅克疀_洗以避免疊氮化物的堆積。
3、在處理或檢測(cè)可疑致病菌時(shí)應(yīng)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸鈉消毒處理30分鐘。含酸的廢液應(yīng)作中和處理。
4、陽(yáng)性對(duì)照液在生產(chǎn)中已作惰性處理,但在使用中依然應(yīng)小心處理。
檢測(cè)過(guò)程:
1、試劑盒應(yīng)按說(shuō)明書(shū)使用。
2、所有試劑在使用前應(yīng)達(dá)到室溫。
3、不要稀釋試劑盒內(nèi)的任何試劑
4、不要混合不同批次試劑盒的試劑。
5、不要冷凍試劑盒內(nèi)的試劑。
6、不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到陽(yáng)性對(duì)照試劑或細(xì)菌樣品。
7、注意凝集狀態(tài),呈凝乳狀或纖維狀可能為非真實(shí)凝集。
8、使用前應(yīng)確保檢測(cè)板清潔干燥。
五、貯存及保質(zhì)期
檢測(cè)試劑盒不使用時(shí)應(yīng)貯存在2~8℃,并應(yīng)在包裝盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用檢測(cè)試劑。
六、樣本
可檢測(cè)選擇性分離平板上的沙門(mén)氏菌可疑菌落。
七、檢測(cè)過(guò)程
質(zhì)量控制:
在每次使用檢測(cè)試劑盒前應(yīng)作下列質(zhì)量控制檢測(cè),以確證試劑的有效性。
1、檢測(cè)試劑的控制:滴1滴測(cè)試試劑(HM
2、陽(yáng)性對(duì)照的控制:滴1滴陽(yáng)性對(duì)照試劑(HM
測(cè)試程序:
1、滴1滴生理鹽水(HM40)于檢測(cè)板的一個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)。
2、用接種環(huán)從選擇性分離平板上挑取可疑菌落,與反應(yīng)環(huán)內(nèi)的生理鹽水混合,形成均勻的混濁的菌懸液。
3、輕搖檢測(cè)板2分鐘,觀察是否會(huì)出現(xiàn)自動(dòng)凝集現(xiàn)象。如果菌懸液保持均勻狀態(tài),繼續(xù)第4步。
4、搖勻乳膠測(cè)試試劑后,滴1滴于已滴加菌懸液的反應(yīng)環(huán)內(nèi),不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到菌懸液。
5、用1支干凈的攪拌棒混勻菌懸液和測(cè)試試劑,輕搖檢測(cè)板2到3次,在2分鐘內(nèi)觀察凝集結(jié)果。
6、記錄結(jié)果后,將攪拌棒和檢測(cè)板進(jìn)行適當(dāng)?shù)南咎幚怼?/span>
八、結(jié)果說(shuō)明
在2分鐘內(nèi)出現(xiàn)凝集,表明樣品中有沙門(mén)氏菌,如不出現(xiàn)凝集,表明測(cè)試菌落中無(wú)沙門(mén)氏菌。
九、使用的局限性
1、結(jié)果應(yīng)依據(jù)所有的臨床或?qū)嶒?yàn)室信息進(jìn)行判斷。
2、沙門(mén)氏菌的粗糙菌株可在生理鹽水中形成非特異性自動(dòng)凝集,因此不可用乳膠試劑盒檢測(cè)。
3、不能檢測(cè)部分無(wú)動(dòng)力沙門(mén)氏菌。
4、有些氧化酶陽(yáng)性菌株可能引起假陽(yáng)性凝集結(jié)果。
5、保存較長(zhǎng)時(shí)間的腸桿菌科的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物可引起非特異性凝集,而保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的沙門(mén)氏菌可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此檢測(cè)菌株應(yīng)為新鮮培養(yǎng)物。
6、乳膠凝集檢測(cè)為初步鑒定結(jié)果,所有的陽(yáng)性結(jié)果的純培養(yǎng)物應(yīng)作進(jìn)一步的鑒定分析和血清分型。
十、檢測(cè)效果對(duì)比
HKM® 沙門(mén)氏菌乳膠試劑盒與一種已廣泛使用的商業(yè)化的乳膠試劑盒檢測(cè)效果對(duì)比,用二種產(chǎn)品檢測(cè)126株沙門(mén)氏菌和58株潛在交叉反應(yīng)的菌株。
|
HKM® |
總計(jì) |
||
陽(yáng)性 |
陰性 |
|||
另一已廣泛使用的乳膠試劑盒 |
陽(yáng)性 |
135** |
1* |
136 |
陰性 |
0 |
48*** |
48 |
|
總計(jì) |
135 |
49 |
|
靈敏度 135/136=99.3%
特異性 48/48=100%
一致性 183/184=99.5%
1*一個(gè)樣品在HKM®檢測(cè)試劑中呈陰性結(jié)果,在對(duì)比檢測(cè)試劑中呈可凝結(jié)果。樣品最終鑒定為bergen沙門(mén)氏菌
**135株分離菌株中,11株在2種試劑盒均存在交叉反應(yīng)。它們分別為:差異檸檬酸桿菌1株、鮑氏不動(dòng)桿菌2株、斯氏普羅威登氏菌1株、蠟樣芽孢桿菌2株、金黃色葡萄球菌4株、鏈球菌1株。以上所有交叉反應(yīng)的菌株中,均不會(huì)在沙門(mén)氏菌選擇性分離平板上生長(zhǎng)或生長(zhǎng)時(shí)菌落呈現(xiàn)非典型的沙門(mén)氏菌菌落形態(tài)。蠟樣芽孢桿菌凝集時(shí)為非典型凝集,(呈纖維狀。)
***1株都伯林沙門(mén)氏菌在二種試劑盒均重復(fù)性的出現(xiàn)陰性結(jié)果。
十一、重復(fù)性
批內(nèi)重復(fù)性:通過(guò)以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對(duì)照抗原及一組34個(gè)細(xì)菌樣品盤(pán)對(duì)同1批產(chǎn)品的靈敏度和特異性進(jìn)行檢測(cè)。由不同的操作者隨機(jī)測(cè)試3次,最終效價(jià)由參照/對(duì)照抗原測(cè)定,并且3次定性分析結(jié)果完全一致。
批間的重復(fù)性:通過(guò)以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對(duì)照抗原及一組34個(gè)細(xì)菌樣品對(duì)3批產(chǎn)品的靈敏度和特異性進(jìn)行檢測(cè)。3個(gè)批次間,最終效價(jià)無(wú)顯著差異及定性分析結(jié)果為100%一致性。廣東環(huán)凱微生物科技有限公司 電話:020-32077703