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3M霉菌和酵母菌檢驗(yàn)測(cè)試片操作以及判讀

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-05-15
3M霉菌和酵母菌檢驗(yàn)測(cè)試片操作以及判讀
一、測(cè)試霉菌和酵母菌 操作方法  
1、未開封時(shí),冷藏于≤8℃(≤46℉),并在保存期內(nèi)用完,高溫度時(shí),凝固水可以排除,包裝物最好于室溫啟開。 2、已開封的,將封口以膠帶封緊。
3、保存再封的袋于≤25℃(≤77℉)和溫度<50%,不要冷藏已開啟的包裝袋,并于一個(gè)月內(nèi)使用完。 4、制備1:10和更大稀釋的食物樣品稀釋液,稱取或吸取食物樣品,置入適宜的無(wú)菌容器內(nèi),如均質(zhì)袋、稀釋瓶、WhirlPak bag或者其他滅菌容器內(nèi)。
5、加入適量的無(wú)菌稀釋液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4調(diào)PH7.2) 、0.1%的旦白膠水(ISO方法6887) 、緩沖旦白膠水(ISO方法6579) 、鹽溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸餾水。不可使用含有枸櫞酸鹽、酸性亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽的緩沖液,因?yàn)樗鼈兡芤种咕L(zhǎng)。

6、攪拌或均質(zhì)樣品.

樣品不需要調(diào)PH,但已調(diào)解PH的樣品也能夠使用。

7、將測(cè)試片置于平坦表面處,揭開上層膜。 8、使用吸管將1ml樣液垂直滴加在測(cè)試片的中央處。
9、允許使上層膜直接落下,切勿向下滾動(dòng)上層膜. 10、手拿壓板橫膜,將壓板放置在上層膜中央處.
11、平穩(wěn)的壓下,使樣液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)面積上,切勿扭轉(zhuǎn)壓板。 12、拿起壓板,靜置至少1分鐘以使培養(yǎng)基凝固。
13、測(cè)試片的透明面朝上,可堆疊至20片,于21-25℃(70-77℉)培養(yǎng)3-5天。
大的或快速生長(zhǎng)的霉菌在培養(yǎng)5天后會(huì)呈現(xiàn)含混模糊的菌落,應(yīng)在培養(yǎng)3天后記錄高數(shù)量計(jì)數(shù)結(jié)果。
如果培養(yǎng)5天后,測(cè)試片上菌落叢生過(guò)快的生長(zhǎng),則以3天計(jì)數(shù)結(jié)果作為估計(jì)菌落數(shù)。培養(yǎng)時(shí)間和溫度因方法而有不同,最通用的認(rèn)可方法是:
AOAC官方方法997.02
(食品類)
21-25℃培養(yǎng)5天。
14、可目視及用標(biāo)準(zhǔn)菌落計(jì)數(shù)器或其它的照明放大鏡計(jì)數(shù),并可參考判讀卡計(jì)算菌落數(shù)。
二、測(cè)試霉菌和酵母菌 判讀方法  
Petrifilm and Mold count MoldTM測(cè)試片為預(yù)先制備好的培養(yǎng)基系統(tǒng),它含有一種冷水可溶性的凝膠劑,營(yíng)養(yǎng)基和一種指示染劑,可提供對(duì)比,利于菌落計(jì)數(shù)。
Yeasr count=44
圖1為酵母菌菌落特征:
  • 小型菌落
  • 菌落有明顯的邊緣
  • 菌落為灰白色到蘭綠色,也可呈粉色
  • 菌落有隆起
  • 菌落顏色均勻一致,沒(méi)有暗色中心
Mold count=27
圖2為酶菌菌落特征:
  • 小型菌落
  • 大型菌落
  • 菌落有擴(kuò)散的邊緣
  • 菌落有不同的顏色(以霉菌產(chǎn)生不同色素而定)如棕色.米色.橙色.和蘭綠色等.
  • 菌落扁平
  • 通常菌落中心顏色深暗
Years and mold count=0
圖3所示在PYM測(cè)試片上沒(méi)有霉菌和酵母菌菌落.
Yeast count=12
Mold count=4
圖4所示在PYM測(cè)試片上有少數(shù)量的霉菌和酵母菌菌落.
Estimated yeast count=480
Mold count=21
圓形的生長(zhǎng)區(qū)大約為30cm2,當(dāng)菌落數(shù)超過(guò)150個(gè)為估計(jì)菌落數(shù),可選擇其中一個(gè)或幾個(gè)有代表性菌落的小方格(1cm2 ),計(jì)算平均菌落數(shù)在乘以30,可得到整個(gè)測(cè)試片上的估計(jì)菌落數(shù).
Yeast count=TNTC (實(shí)際菌數(shù)>104)
圖6所示在PYM測(cè)試片邊緣框里光亮區(qū)的的小型.蘭色菌落同樣也分布在整個(gè)測(cè)試片中(盡管有較小的可見度),這是膠木菌菌落太多無(wú)法計(jì)數(shù)(TNTC)現(xiàn)象.
Mold count=59
圖7所示,在測(cè)試片上霉菌菌落出現(xiàn)堆擠和彼此覆蓋,為了方便計(jì)數(shù),可將測(cè)試片分成幾個(gè)區(qū)域,計(jì)算每個(gè)有明顯暗色中心的菌落.所劃的方形區(qū)內(nèi)有15個(gè)霉菌菌落。
Mold count=TNTC
圖8a和圖8b為同一樣品的測(cè)試結(jié)果.圖8a為1:10樣品稀釋液,菌落小、虛弱暗淡、數(shù)量多、計(jì)數(shù)困難。圖8b為1:100樣品稀釋液,生長(zhǎng)菌落數(shù)在適宜范圍(15-150個(gè))內(nèi),很容易計(jì)數(shù)。
Yesat and Mold Count=0 yesat and Mold Count=0
 
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