近年來中藥制劑的發(fā)展比較迅速，但在純中藥制劑中添加化學(xué)藥，嚴(yán)重違反了國家法規(guī)，威脅患者的健康。如治療男性性功能障礙的“純中藥”中加進(jìn)“西地那非”；在減肥藥中加進(jìn)西布曲明或能導(dǎo)致人出現(xiàn)甲亢癥狀的甲狀腺激素等。因此必須建立快速、靈敏、可靠的分析檢測方法，為純中藥制劑驗明正身。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC／MS)法以其高專屬性的上風(fēng)廣泛應(yīng)用于藥物的定性檢測中，本文建立了LC／MS法用于檢測純中藥降糖藥物中是否非法摻人化學(xué)降糖藥物格列本脲。格列本脲為第二代磺酰脲類藥物，若用量把握不當(dāng)，極易發(fā)生低血糖癥。

 

1、儀器與試藥

 

美國Finnigan公司LCQ型液相色譜(質(zhì)譜聯(lián)用儀，包括電噴霧離子源(ESI)以及LCQ數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，并配有直接進(jìn)樣用注射泵和250μL進(jìn)樣器；日本島津公司HPLC系統(tǒng)(包括LC一10AD泵，Rheodyne7125進(jìn)樣閥)。

 

格列本脲對照品(純度為99.5％，沈陽藥科大學(xué)藥劑教研室)；6種純中藥降糖藥物(遼寧省藥品檢驗所提供，分別為不同廠家6個批次：20030108，200203O2，20020601，010401，20020621和20010313)；甲醇，乙腈(色譜純，天津市康科德科技有限公司)，甲酸(分析純，天津市博迪化工有限公司)，水為二次重蒸水。

 

2、實驗方法

 

2.1 色譜條件色譜柱：ZorbaxEclipseXDB-C8柱(5μm粒徑，150×4.6mm，Agilent)；活動相：乙腈-水-甲酸(70：30：1)；流速：O.5mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量5OμL。

 

2.2 質(zhì)譜條件電噴霧離子源，正離子檢測，離子源噴射電壓：4.50kV；毛細(xì)管溫度：200℃；毛細(xì)管電壓：6.25V；鞘氣流速：1.05L/min；輔助氣流速：O.15L/min；檢測方式：一級全掃描方式、二級全掃描方式、三級全掃描方式和選擇離子監(jiān)測方式(SIM)。

 

2.3 格列本脲標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精密稱取一定量的對照品置容量瓶中加人活動相溶解并稀釋至刻度，使?jié)舛葹?00μg/mL。

 

2.4 受試溶液的配制取不同批號的被試膠囊各10粒，取出內(nèi)容物分別混勻，將相當(dāng)于1粒膠囊內(nèi)容物重量的樣品分別置10mL具塞玻璃試管中，加進(jìn)3mL甲醇，渦流2min，超聲20min，離心10min，取上清液用于分析測定。

 

3、實驗結(jié)果

 

3.1 格列本脲的色譜和質(zhì)譜行為采用正離子檢測方式對格列本脲對照品進(jìn)行LC／MS分析，其保存時間為6.4min；多級質(zhì)譜分析結(jié)果，在一級全掃描質(zhì)譜分析中產(chǎn)生的準(zhǔn)分子離子[M H] 峰為m／z494，[M Na] 峰為m／z516，[2M H] 峰為m／z987，[2M Ma] 峰為m／zlO09，在二級全掃描質(zhì)譜分析中，分子中胍基左側(cè)的酰胺鍵斷裂產(chǎn)生m／z369的碎片離子，進(jìn)一步對m／z369進(jìn)行三級全掃描質(zhì)譜分析，主要產(chǎn)生左側(cè)酰胺鍵斷裂天生的碎片離子m／z169，總結(jié)其裂解途徑，為實際樣品中化合物的鑒定提供了可靠的依據(jù)。

 

3.2 待測樣品的檢測結(jié)果在相同的色譜及質(zhì)譜條件下對6種純中藥制劑的甲醇提取液進(jìn)行LC／MS分析，均檢測到色譜行為與格列本脲對照品相同的化合物，而且在相應(yīng)的一級全掃描質(zhì)譜分析中檢測到與格列本脲相同的準(zhǔn)分子離子m／z494；為進(jìn)一步確定所檢測到化合物的結(jié)構(gòu)，對其進(jìn)行多級質(zhì)譜分析，該化合物的二級及三級全掃描質(zhì)譜與格列本脲對照品完全相同，由此可以證實在6種被試中藥降糖藥物中所檢測到的化合物為化學(xué)藥格列本脲。

 

4、討論

 

文獻(xiàn)中對格列本脲的檢測方法有紫外檢測法、熒光檢測法和質(zhì)譜檢測法。中藥制劑中通常都含有多種中藥材，每種藥材中均含有多種組分，采用紫外檢測法或熒光檢測法對中藥提取液進(jìn)行檢測時，由于選擇性不強(qiáng)，在干擾組分多的情況下，對待測物的色譜分離提出了更高的要求，因此可能會產(chǎn)生假陽性結(jié)果。本文采用LC／MS技術(shù)，將高效液相色譜的高分離能力與質(zhì)譜分析的高選擇性相結(jié)合，對純中藥制劑中非法摻進(jìn)的化學(xué)降糖藥格列本脲進(jìn)行多級質(zhì)譜分析，對其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確證，增強(qiáng)了檢測結(jié)果的可信度。該法靈敏度高，選擇性強(qiáng)，對該中藥制劑的質(zhì)量控制具有現(xiàn)實意義。