原理
間接炭凝集反應(yīng)簡稱炭凝。它是以炭粉微粒作為載體,將已知的抗體球蛋白吸附于這種載體上,形成炭粉抗體復(fù)合物,當(dāng)炭血清與相應(yīng)的抗原相遇時(shí),二者發(fā)生特異性結(jié)合,形成肉眼可見的炭微粒凝集塊。
目前炭凝反應(yīng)已用于炭疽、鼠疫和馬副傷寒性流產(chǎn)等病的診斷。
材料與試劑
1.炭粉 炭粉粒子最好大小在0.12mm~0.15mm,目前市場(chǎng)上出售的炭粉均不合要求,必須過300目/寸的標(biāo)準(zhǔn)篩以300r/min離心去沉淀,再以3 000r/min離心去上清,收集沉淀物。
2.高免血清
3.待測(cè)標(biāo)本
4.滅活兔血清
5.正常血清
6.標(biāo)準(zhǔn)抗原
7.0.05mol/L pH7.2PBS液
8.1%硼酸的PBS液
操作方法
1.炭致敏 取濕炭粉0.25g(干粉0.10g),加入經(jīng)56℃~60℃滅活30min的稀釋高免血清3ml,充分搖勻,置37℃致敏30min,不時(shí)搖動(dòng),取出后用pH 7.2 PBS液洗滌3次。最后一次用含1%硼酸和1%兔血清的PBS液洗滌一次,離心去上清,再取此液3ml,混勻即可。同時(shí)以正常血清致敏的炭粒處理,以作對(duì)照。
致敏血清(加1/萬硫柳汞防腐)于室溫或4℃冰箱中保存,一年內(nèi)有效。
2.取潔凈玻璃板一塊,以玻璃鉛筆劃成小格,加被檢標(biāo)本0.10ml,再加免疫炭血清0.05ml,充分混勻,靜止1min~5min,判定結(jié)果。同時(shí)設(shè)三個(gè)對(duì)照:
⑴免疫炭血清 標(biāo)準(zhǔn)抗原。
⑵正常炭血清 標(biāo)準(zhǔn)抗原。
⑶正常炭血清加待檢抗原。
結(jié)果判定
在對(duì)照完全成立的情況下,判定本試驗(yàn)結(jié)果:
“++++”:炭粉全部凝集,液體完全清亮透明。
“+++” :炭粉大部分凝集,液體透明。
“++” :炭粉一半凝集,液體較透明。
“+” :炭粉微凝集,但與對(duì)照有差別,液體混濁。
“—” :炭粉不凝集,液體不透明。
炭凝以“++”做為反應(yīng)滴度的終點(diǎn)。