一、用途

軍團(tuán)菌乳膠凝集檢測(cè)試劑用于快速確證鑒定從選擇性平板上分離出的可疑嗜肺軍團(tuán)菌和常規(guī)分離的軍團(tuán)菌。試劑盒適用于檢測(cè)由疑似嗜肺軍團(tuán)菌引起的肺炎病人的樣品或環(huán)境樣品。試劑盒可分別檢測(cè)嗜肺軍團(tuán)菌血清1群和2-15群和常規(guī)分離的軍團(tuán)菌。(根據(jù)臨床微生物檢測(cè)手冊(cè)提及嗜肺軍團(tuán)菌血清16群，血清16群與血清6型交叉反應(yīng)，因此理論上2-15群乳膠試劑也與血清16群凝集)。該試劑盒僅供專業(yè)人員使用。

二、原理

測(cè)試試劑1，乳膠顆粒表面包被與嗜肺軍團(tuán)菌血清1群具有特異性的兔多克隆抗體。測(cè)試2-15群試劑的乳膠顆粒表面包被與嗜肺軍團(tuán)菌血清2-15群特異性的多克隆兔抗體。軍團(tuán)菌菌種測(cè)試試劑，乳膠顆粒表面包被與10種常規(guī)分離的軍團(tuán)菌血清具有特異性的兔多克隆抗體。（參見以下表格）當(dāng)乳膠顆粒與含軍團(tuán)菌或者從相關(guān)的軍團(tuán)菌加熱滅活的抗原的懸液混合后，發(fā)生免疫化學(xué)反應(yīng)，使乳膠顆粒迅速凝集。血清1群抗體包被的乳膠顆粒只在遇到血清1群的抗原時(shí)才會(huì)發(fā)生凝集，同樣，血清2-15群抗體包被的乳膠顆粒只有在遇到血清2-15群中的任何一種抗原時(shí)，才會(huì)發(fā)生凝集。軍團(tuán)菌抗體包被的乳膠顆粒與10種相關(guān)的軍團(tuán)菌會(huì)發(fā)生凝集。（參見以下表格）

血清1群乳膠試劑與血清1群抗原的反應(yīng)比血清2-15群乳膠試劑與血清2-15群抗原的反應(yīng)較快較強(qiáng)。其原因?yàn)樵谏�產(chǎn)過程中2-15群抗體的混合彼此有一定的稀釋作用。軍團(tuán)菌乳膠與嗜肺軍團(tuán)菌血清1乳膠試劑的作用方法相同。

三、試劑盒組成成分

REAG TEST 1  1群測(cè)試試劑　HM45a 軍團(tuán)菌血清1群乳膠試劑　2.5mL

乳膠顆粒包被與嗜肺軍團(tuán)菌血清1群特異性的兔多克隆抗體和鼠單克隆抗體。含0.099%的疊氮化鈉。（藍(lán)色瓶蓋）

REAG TEST 2-15  2-15群測(cè)試試劑　HM45b 軍團(tuán)菌血清2-15群乳膠試劑　2.5mL

乳膠顆粒包被與嗜肺軍團(tuán)菌血清2-15群特異性的兔多克隆抗體。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（黃色瓶蓋）

CONTROL +  陽性對(duì)照試劑　HM45c　陽性對(duì)照　1.0mL

可與測(cè)試試劑1和2-15反應(yīng)的不具活性的軍團(tuán)菌的抗原，含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（黑色瓶蓋）

REAG TEST SPECIES   軍團(tuán)菌菌種測(cè)試試劑 HM45d 軍團(tuán)菌血清特殊乳膠試劑 2.5mL

乳膠顆粒表面包被與10種常規(guī)分離的軍團(tuán)菌血清具有特異性的兔多克隆抗體。（參見以下表格）

含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（紅色瓶蓋）

NaCl 0.85%   0.85%鹽水　HM40　0.85%生理鹽水　5.0mL

含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（白色瓶蓋）

使用說明書

檢測(cè)板

攪拌棒

需要的其它材料

l  接種環(huán)

l  軍團(tuán)菌選擇性分離培養(yǎng)基

l  用于煮沸處理的玻璃試管

l  0.85%生理鹽水

四、警告和注意事項(xiàng)

安全：

1、試劑僅供體外診斷使用。

2、試劑盒作防腐劑使用的疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應(yīng)形成易爆的金屬疊氮化物�？捎么罅克疀_洗以避免疊氮化物的堆積。

3、在處理或檢測(cè)可疑致病菌時(shí)應(yīng)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸鈉消毒處理30分鐘。含酸的廢液應(yīng)作中和處理。

4、陽性對(duì)照液在生產(chǎn)中已作惰性處理。但在使用中，依然應(yīng)遵循潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序。

檢測(cè)過程：

1、試劑盒應(yīng)按說明書使用。

2、所有試劑在使用前應(yīng)達(dá)到室溫。

3、不要稀釋試劑盒內(nèi)的任何試劑。

4、不要混合不同批次試劑盒的試劑。

5、不要冷凍試劑盒內(nèi)的試劑。

6、不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到陽性對(duì)照試劑或細(xì)菌樣品。

7、注意凝集狀態(tài)，呈凝乳狀或纖維狀可能為非真實(shí)凝集。

8、使用前應(yīng)確保檢測(cè)板清潔干燥。

五、貯存及保質(zhì)期

檢測(cè)試劑盒不使用時(shí)應(yīng)貯存在2～8℃，并應(yīng)在包裝盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用檢測(cè)試劑。

六、樣本

檢測(cè)選擇性分離平板上分離的可疑軍團(tuán)菌菌落。

七、檢測(cè)過程

質(zhì)量控制：

在每次使用檢測(cè)試劑盒前應(yīng)作下列質(zhì)量控制檢測(cè)，以確證試劑的有效性。

1、檢測(cè)試劑的控制：輕輕搖勻測(cè)試試劑(HHM45a，HM45b，HM45d)，將兩種測(cè)試試劑分別滴1滴于檢測(cè)板的二個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)，接著在兩個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)各滴1滴生理鹽水(HM40)，用2支攪拌棒分別在整個(gè)區(qū)域內(nèi)混勻測(cè)試液和生理鹽水，輕搖檢測(cè)板2分鐘并觀察是否會(huì)出現(xiàn)凝集。如果出現(xiàn)凝集反應(yīng)，表明檢測(cè)試劑或生理鹽水受到污染，應(yīng)廢棄處理。

2、陽性對(duì)照的控制：滴1滴陽性對(duì)照試劑(HM45c)于1個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)，接著在該反應(yīng)環(huán)內(nèi)滴1滴混勻的測(cè)試試劑1(HM45a)，不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到陽性對(duì)照試劑。用攪拌棒在整個(gè)區(qū)域內(nèi)混勻液體，輕搖檢測(cè)板2分鐘,應(yīng)觀察到凝集現(xiàn)象。重復(fù)上述步驟，做測(cè)試試劑2-15（HM45b）和軍團(tuán)菌菌種測(cè)試試劑（HM45d）的檢測(cè)，并應(yīng)觀察到凝集現(xiàn)象。如果其中一種測(cè)試試劑未出現(xiàn)凝集反應(yīng)，應(yīng)采用新鮮的檢測(cè)試劑盒。

測(cè)試程序：

1、各滴1滴生理鹽水(HM40)于檢測(cè)板的3個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)。

2、用接種環(huán)從選擇性分離平板上挑取3～4個(gè)可疑軍團(tuán)菌菌落，分別在2個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)的生理鹽水旁作涂片操作。

3、用攪拌棒在整個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)混勻生理鹽水和菌落，形成均勻的較濃菌懸液。

4、如果菌懸液保持均勻狀態(tài)，繼續(xù)第7步。如果菌懸液出現(xiàn)纖維狀或粒狀物（培養(yǎng)物較老或呈黏液狀時(shí)，易出現(xiàn)此種現(xiàn)象），按下述步驟操作。

5、往玻璃試管中加入0.5mL的生理鹽水，從選擇性平板中挑取可疑菌落制成均勻的菌懸液。

6、煮沸菌懸液5分鐘，冷卻至室溫后，分別取30μL滴加在檢測(cè)板上2個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)。

7、輕輕的搖勻測(cè)試乳膠試劑（HM45a,HM45b），形成均勻的懸液。

8、滴1滴測(cè)試試劑1于一個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)的菌懸液上，滴1滴測(cè)試試劑2-15于另一個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)的菌懸液上。不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到菌懸液。

9、各用1支干凈的攪拌棒在整個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)混勻菌懸液和測(cè)試試劑。

10、輕搖檢測(cè)板2分鐘，并觀察凝集結(jié)果。

11、記錄結(jié)果后，將攪拌棒和檢測(cè)板進(jìn)行適當(dāng)?shù)南�毒處理�?/span>

八、結(jié)果說明

觀察凝集結(jié)果，按下表進(jìn)行判斷

*非特異性凝集不排除存在軍團(tuán)菌的可能性，只是結(jié)果不確定。

九、使用的局限性

1、結(jié)果應(yīng)依據(jù)所有的臨床和實(shí)驗(yàn)室信息進(jìn)行判斷。

2、纖維狀凝集可能為假陽性結(jié)果，需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)確證。

3、培養(yǎng)時(shí)間過長或黏稠培養(yǎng)物在生理鹽水中不易形成均勻的菌懸液而出現(xiàn)非典型的凝集。因此要按上述的方法對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行前處理。

4、HKM^®軍團(tuán)菌乳膠試劑盒用于檢測(cè)選擇性平板上分離出的可疑1-15群嗜肺軍團(tuán)菌。陽性結(jié)果的菌株應(yīng)利用其在不含半胱氨酸的軍團(tuán)菌選擇性平板上不生長的特性確證其為軍團(tuán)菌屬。

十、檢測(cè)效果對(duì)比

HKM^®軍團(tuán)菌乳膠試劑盒與一種已廣泛使用的商業(yè)化的乳膠試劑盒檢測(cè)效果對(duì)比，用二種商品檢測(cè)分離出的嗜肺軍團(tuán)菌、非嗜肺軍團(tuán)菌和易存在潛在交叉反應(yīng)的菌株，共128株。

靈敏度　50/50＝100%

特異性　478/78＝100%

一致性　128/128＝100%

同時(shí)用HKM^® 軍團(tuán)菌乳膠試劑盒和對(duì)比試劑盒檢測(cè)分離出的嗜肺軍團(tuán)菌和其它軍團(tuán)菌，共70株，以辨別嗜肺軍團(tuán)菌血清1群和血清2-15群。

＊           這組50株分離的菌株中，12株在兩種檢測(cè)試劑中均存在交叉反應(yīng)。它們分別是金黃色葡萄球菌(4)、差異檸檬酸桿菌(1)、鮑氏不動(dòng)桿菌(2)、斯氏普羅威登斯菌(1)、蠟樣芽孢桿菌(2)、肺炎克雷伯氏菌(1)、鏈球菌屬(1)。但所有這些菌株接種在軍團(tuán)菌選擇性平板上培養(yǎng)時(shí)，均不生長或生長的菌落特征非常不典型。同時(shí)蠟樣芽孢桿菌呈現(xiàn)非典型凝集(呈纖維狀)。

＊            

所有分離出的嗜肺軍團(tuán)菌血清1群菌株與測(cè)試試劑2-15均無交叉反應(yīng)，同樣地，所有嗜肺軍團(tuán)菌血清2-15群菌株與測(cè)試試劑1均無交叉反應(yīng)。所有分離的非嗜肺軍團(tuán)菌與HKM^®軍團(tuán)菌乳膠試劑盒中的兩種測(cè)試試劑均無交叉反應(yīng)。

軍團(tuán)菌菌種乳膠試劑與所有測(cè)試檢查的嗜肺軍團(tuán)菌血清群都沒有交叉反應(yīng)。軍團(tuán)菌特殊乳膠試劑能檢測(cè)以下10種軍團(tuán)菌：

軍團(tuán)菌菌種乳膠試劑的特異性實(shí)驗(yàn)顯示legionella sainthelensi spp1,hacklaie spp1和 tucsonensis也能產(chǎn)生陽性結(jié)果。

十一、重復(fù)性

批內(nèi)重復(fù)性：通過以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對(duì)照抗原及一組47種細(xì)菌樣品盤對(duì)同1批產(chǎn)品的靈敏度和特異性進(jìn)行檢測(cè)。由不同的操作者隨機(jī)測(cè)試3次，最終效價(jià)由參照/對(duì)照抗原測(cè)定，并且3次定性分析結(jié)果完全一致。