Uu在含95% 氮?dú)夂?%CO2 環(huán)境中生長良好。其生長最適pH為5.5-6.5,最適溫度為36℃-37℃。Uu具有尿素酶，能分解尿素產(chǎn)氨，使含酚紅指示劑的Uu液體培養(yǎng)基pH值上升，顏色由黃色變?yōu)榧t色。再將液體培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種到Uu固體培養(yǎng)基上，能生長成具特征性油煎蛋樣集落。

（1 ）液體培養(yǎng)基：支原體肉湯培養(yǎng)基80mL，馬血清或小牛血清10mL，酵母浸液10mL, 
10 %尿素溶液0.5mL-1.5mL, 0.4%酚紅溶液0.5mL,青霉素（使其在培養(yǎng)基中的濃度為500U/mL-2000U/mL,）用1N HCl 調(diào)pH值至5.5-6.5, 用小試管分裝后置冰箱中備用，每管1.5-2.0mL。

（2 ） 固體培養(yǎng)基：在100mL 支原體肉湯培養(yǎng)基中，加入瓊脂1.2-1.4g, ,高壓滅菌后冷卻到 50 ℃左右，逐一加入上述添加劑。搖勻，倒入無菌平皿中，待凝固后，置冰箱中備用。

接種標(biāo)本后，經(jīng)孵育，若培養(yǎng)基發(fā)生由黃變紅的顏色變化，透明無混濁（有別于某些細(xì)菌及 真菌生長）則可初步判斷為有支原體生長。大多數(shù)Uu在24h內(nèi)可獲得陽性結(jié)果。如果培養(yǎng)基發(fā)生顏色變化，但液體又有混濁，則應(yīng)排除雜菌污染, 可用0.45μm濾膜過濾后，作再接種觀察。進(jìn)一步診斷需將液體培養(yǎng)物接種到固體培養(yǎng)基上培養(yǎng), 經(jīng)Dienes法染色后在低倍顯微鏡下觀察集落形態(tài)。陰性結(jié)果最好觀察５天。Uu 在固體培養(yǎng)基上集落核心呈粗顆粒狀,具極窄的邊，有時呈油煎蛋樣。如用 Dienes 法染色，集落為特異的藍(lán)色。一般細(xì)菌的菌落不著色，容易鑒別。

（二）代謝抑制試驗(yàn)

根據(jù)特異性抗體能阻止支原體的生長和代謝這一特性，可用病人血清進(jìn)行代謝抑制試驗(yàn)。在加有抗血清的培養(yǎng)基中，支原體的代謝受到抑制，從而阻止了培養(yǎng)基的顏色改變。

代謝抑制試驗(yàn)也可用于檢測感染支原體患者血清抗體的滴度。即將血清作10倍連續(xù)稀釋后，滴入支原體培養(yǎng)液，并以不加血清的支原體試驗(yàn)管和不加支原體液的培養(yǎng)基管作對照。經(jīng)37℃培養(yǎng)，不加抗血清的培養(yǎng)管支原體應(yīng)生長良好，培養(yǎng)基變成紅色（Uu或Mh），未加支原體液培養(yǎng)基管顏色不變。未發(fā)生顏色變化的最高血清稀釋度為代謝抑制試驗(yàn)的抗體滴度。

（三） 間接血凝試驗(yàn)

在一定條件下，抗體和相應(yīng)抗原相遇，可形成抗原抗體復(fù)合物。這種復(fù)合物分子團(tuán)很小,不能形成肉眼可見的反應(yīng)。用經(jīng)鞣酸處理的紅細(xì)胞作載體，將抗原吸附在其表面，使紅細(xì)胞致敏，待與相應(yīng)的血清抗體相遇時，可出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。

（四）生長抑制試驗(yàn)

特異性抗體能阻止支原體的生長和代謝。用直徑為6mm-8mm的圓形滅菌濾紙片，以未稀釋抗血清浸透后放入無菌平皿內(nèi)，于４℃下干燥后待用。 吸取待檢菌液0.5mL涂布于固體培養(yǎng)基上，置３7℃使瓊脂表面稍干燥。以無菌操作鑷取抗血清紙片放于瓊脂表面,培養(yǎng)4日-5日后,在低倍顯微鏡下觀察濾紙片周圍有無支原體生長。若濾紙片周圍無菌落生長，出現(xiàn)抑菌圈大于2mm者表示該支原體與抗血清系同種免疫原，小于2mm判為異種。

（五）分子生物學(xué)診斷方法

目前主要應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法及DNA探針技術(shù)作診斷。前者具有高度特異性和敏感性、且快速、簡便。但操作要求極為嚴(yán)格。

聚合酶鏈反應(yīng)的原理是DNA片段擴(kuò)增，其中支原體引物的選擇是PCR檢測技術(shù)中的關(guān)鍵。1９９1年Willonghby 設(shè)計的引物來自脲酶基因。Zheng等（1995）用MB抗原基因引物對所有14個血清型的Uu均顯示良好的PCR擴(kuò)增效果，其敏感性較Willonghby設(shè)計的脲酶基因引物更好。